ADC的成功也逐渐转向了双抗ADC，特别是百利的EGFR/HER3双抗ADC的成功，在今年的AACR会议上，Zymeworks披露了其双抗ADC的开发策略，并且以FRα和NaPi2b双抗ADC的开发进行了详细说明。

 

首先其对两个靶点的表达进行了分析研究，因为对于ADC，靶点的表达在很大程度上决定了抗体的药效，而对于双抗ADC，不同靶点的分布以及丰度决定了双抗两个靶点结合端的相对亲和力。对来自于98位高级别浆液性卵巢癌（HGSOC）的肿瘤样本分析发现，多数样本都高表达FRα和NaPi2b，其中FRα相对来说具有更高的表达量，同时也有少量的样本两个靶点机会都不表达。

双抗的结构在很大程度上决定了抗体的效果，包括亲和力，对靶点的偏向性结合，脱靶毒性等，Zymeworks本身是做双抗出身的，因此在双抗结构方面具有丰富的抗体结构，包括1+1，2+1和2+2等多种不同的结构，因此在构建双抗ADC中，其可以进行高通量筛选，获得疗效做好的结构。

根据以往双抗开发经验，对于高表达的靶点，抗体端的亲和力可能不需要太高，而抗体的表位结合可能更重要，而对于低表达的靶点，高亲和力的抗体能够增加抗体的选择性。因此可能基于这一原则，Zymeworks在NaPi2b端选择了亲和力较高的抗体，而对于表达相对的较高的FRα端，其选择了多个不同的亲和力的抗体（高、中、低，其中中等亲和力和NaPi2b相当）；

在此基础上，zymeworks进行了充分组合，同时结合其双抗平台，构建了多达48种双抗进行筛选，该筛选不仅对抗体结构进行筛选，也同时对抗体的形式（Fab或者是scFv）等方面进行了穷尽筛选，从而保证可以筛选到最优组合的抗体。

在双抗的基础上，偶联毒素并构建双抗ADC。Zymeworks在不同的肿瘤细胞株上评价了这些双抗ADC的效果，这些细胞株在两个靶点的表达上具有不同的表达水平，因此可以充分的反应双抗ADC的特征。从结合方面来看，对于两个靶点都高表达的肿瘤细胞，双抗ADC的结合能力其实并比一定比单抗优秀，这主要是抗体的价位的影响，但是当某一靶点表达相对比较低时，部分双抗ADC对细胞的结合基本和单抗相当甚至优于单抗，这基本达到的双抗ADC的设计的部分目的—克服肿瘤异质性。

 

对于内吞，因为双抗ADC结合两个靶点后整体上是一个三元复合物，因此多数内吞效果优于单抗，特别是对于两个靶点表达丰度不均衡的细胞，但是内吞效果也是和抗体结构相关的，通过高通量筛选可以筛选到内吞更好的双抗。

 

在杀伤活性方面，对于单抗ADC，两个靶点的表达对其活性也有很大的影响，对于FRα，在IGROV-1中，两个靶点都是高表达，而其中2L16单抗ADC几乎没有杀伤活性，而在JEG-3细胞中，FRα高表达，NaPi2b低表达，而2L16单抗ADC具有较强的杀伤活性。对于双抗ADC，当两个靶点都高表达时，不同双抗ADC对肿瘤细胞的杀伤差异性相当较小，而当两个靶点差异较大时，不同结构对药物的杀伤影响会比较大。

Zymeworks在双抗的开发方面具有很强的实力，而且在ADC爆发前也开发了双抗ADC。第一三共的Dxd的成功引爆了ADC赛道，zymeworks也开发了喜树碱类Payload。基于前期双抗技术的基础，zymeworks对于双抗ADC的开发采用了双抗类似的策略—高通量筛选。相对于双抗，双抗ADC的开发更加复杂，其不仅和双抗的结合有关，而且与payload及linker相关，因为不同于双抗对肿瘤细胞的杀伤，双抗ADC主要是通过payload的毒性对肿瘤细胞杀伤，并且依靠抗体介导的内吞，甚至旁观者效应。高通量筛选，可以综合双抗的结构，基于药效，实现多因素的全方位筛选，从而筛选到最优的候选分子。